RUS
ENG
RUS
ENG
Мобильное
приложение
Обратная
связь
+7 (495) 745-05-51

Эффективность получения сексированных эмбрионов КРС методом in vitro

18.10.2017: Как это осуществляется в "Бетагран - Липецк".


Дмитрий Машталер
старший эмбриолог ООО "Бетагран- Липецк"

В течении последнего времени в России уделяется существенное внимание вопросам в области воспроизводства стада и повышения уровня племенных качеств животных, так как это является краеугольным камнем в отечественном животноводстве. Однако успешное решение данных вопросов невозможно без использования современных методов и технологий, которые уже давно нашли свое применение в странах Запада.

Получение эмбрионов крупного рогатого скота методом in vitro - современный и прогрессивный биотехнологический метод, позволяющий значительно ускорить процесс воспроизводства высокопродуктивных животных. Данный метод состоит из нескольких этапов: извлечение ооцитов из антральных фолликулов яичника (OPU), созревания ооцитов (IVM - in vitro maturation); оплодотворения (IVF - in vitro fertilization) и эмбриональной культуры (IVC - in vitro culture). Важным аспектом данной технологии является то, что получать яйцеклетки от животных доноров можно как прижизненно, используя метод трансвагинальной аспирации, так и от убойного материала (яичники коров с мясокомбината). Получение разделённых по полу эмбрионов - востребованный и перспективный метод, который заключается в оплодотворении яйцеклеток сексированной спермой быков. Оплодотворение яйцеклеток разделённой по полу спермой в отличие от обычной даёт возможность получать особей желательного пола с вероятностью до 93 %. Помимо возможностей в области селекции данный метод имеет и ряд экономических преимуществ, а именно: при пересадке эмбрионов, не разделённых по полу, частота рождения бычков составляет до 55%. Что имеет немаловажное значение в молочном скотоводстве, где есть большая потребность в ремонтных тёлочках с высокой молочной продуктивностью.

Исходя из этого перед коллективом лаборатории ООО «Бетагран- Липецк» была поставлена задача направленная на создание оптимального протокола оплодотворения и культивирования доимплантированных эмбрионов in vitro. Для этого ооциткумулюсные комплексы получали прижизненно из антарльных фолликулов диаметром 2-6 мм от коров доноров методом TAU (транс вагинальной аспирации. После чего ооциткумулюсные комплексы помещались в среду дюльбекко с добавлением с 5% эстральной сыворотки, 4% р-ра гентамицина и р-ра. гепарина. Поиск и морфологическую оценку осуществляли на стереомикроскопе лабораторного класса, Olympus SZ51 при 200 кратном увеличении. Для экспериментов отбирали ооциты средней величины с мелкозернистой ооплазмой, окруженные компактным многослойным кумулюсом. Для дозревания ооцитов использовали среду 199 (Medium 199, Hepes modification, 25mM.) с добавлением 10% эстральной сыворотки крови крупного рогатого скота, Na-пирувата, BSA, 1.0 ЕД / мл лютенизирующего гормона, 10 ME/мл, фолликулостимулирующего гормона, 1,0мкг / мл эстрадиола (спиртовой раствор) и 50 мкг / мл гентамицина.

Ооциты помещали в лунки планшетов в среду созревания в объёмом 500 мкл под минеральным маслом ("Sigma", США) и культивировали в течение 20-24 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере 5 % CO2 в воздухе. Для оплодотворения использовали разделённое по полу криоконсервированное семя быков в пайэтах объёмом 0,25 мл из расчёта 1 доза на 30 яйцеклеток. Оттаивание производили при температуре + 37 º С в течении 40 секунд. По той же схеме оттаивалось и обычное семя быков. Получение подвижной фракции сперматозоидов проводили путём центрифугирования в градиенте плотности (р-р перколла) при оборотах ротора центрифуги 300G. Выход подвижных сперматозоидов при центрифугировании в градиенте плотности был больше, чем при использовании метода флотации (Swim Up). Для оплодотворения яйцеклетки перемещались в лунки со средой Fert-TALP объёмом 80 мкл. И инкубировались совместно со сперматозоидами в течении 18-20 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере с содержанием 5 % CO2.

После оплодотворения зиготы отмывали в растворе SOF и механически удаляли клетки кумулюса посредством пепетирования при помощи наконечников для денудации ооцитов диаметром 135 мкм. Очищенные зиготы помещались в среду на основе SOF c добавлением BSA, MEM vitamins, MEM Niaa, MEM iaa в лунки планшетов объёмом 500 мкл, покрытые минеральным маслом ( Sigma ,США) и культивировали при температуре 38,5º С в увлажненной атмосфере под газовой фазой (по 5% CO2 и O 2 и 90 % N2) в течение 7-8 суток. Количество оплодотворённых зигот подсчитывали через 48 и 62 часа после оплодотворения.

Для определения эффективности оплодотворения сексированной спермы использовалось заморожено-оттаянное семя пяти быков. Было оплодотворено 1050 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 944 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 89,93%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 29,42%

Таблица 1 Оплодотворяемость и выход эмбрионов сексированное семя

№п/п

Бык

∑ опл. окк

∑ дроб.

% от дроб

Выход бластоцист

% от опл.

% от дроб.

1

Маузер

346

321

93,00%

94

29,28%

27,16%

2

Мосби

358

322

90,60%

96

29,81%

26,81%

3

Коди

121

107

88,45%

50

46,72,%

41,32%

4

Бигшот

92

88

90,88%

32

36,36%

34,78%

5

Инспект

117

106

91,55%

37

34,90%

34,90%

итого

1050

944

89,93%

309

32,73%

29,42%

Во втором случае использовалось обычное заморожено-оттаянное семя от четырёх быков. Было оплодотворено 770 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 708 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 91,94%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 35,58%.

Таблица 2 Оплодотворяемость и выход эмбрионов обычное семя

№п/п

Вид семени

∑ опл. окк

∑ дроб

% от дроб

Выход бластоцист

% от опл.

% от дроб

1

Обычное

770

708

91,94%

274

38,70%

35,58%

2

сексированное

1050

944

89,93%

309

32,73%

29,42%


Таким образом сравнивая вышеперечисленные данные, можно сделать вывод, что оплодотворяющая способность сексированного и традиционного семени не имеет значительных расхождений.


Таблица 3 Сравнительная характеристика и эффективность использования сексированного и традиционного семени при производстве эмбрионов in vitro.


Так разница составила 2,01% в пользу обычного семени. Выход эмбрионов был больше на 6,16 в пользу обычного семени. Несмотря на то, что культивирование эмбрионов производилось на одной культуральной системе, количество полученных эмбрионов in vitro было выше в группе, где использовалось обычное семя. Мы предполагаем, что это связанно с окрашиванием сперматозоидов флуоресцентной краской, из-за чего снижается энергетический запас, что и может обуславливать меньший жизненный потенциал гамет по сравнению с обычным семенем, как следствие - остановку развития некоторых эмбрионов.

Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что разработанный протокол оплодотворения и культуральная система обладает высоким потенциалом и позволяет получать в массовом количестве разделённые по полу эмбрионы по технологии in vitro. А также может использоваться для получения зигот и предимплантационных эмбрионов КРС in vitro для различных биотехнологических программ.

Статья взята с сайта © DairyNews.ru http://www.dairynews.ru/news/effektivnost-polucheniya-seksirovannykh-embrionov-.html

18.10.2017 0
11.06.2025
Быстрее, выше, сильнее!

7 июня в Москве состоялся масштабный фестиваль химии и спорта «ХИМФЕСТ», организованный Минпромторгом России и Российским Союзом химиков. Мероприятие объединило около 800 представителей химической отрасли.

DSC00297-Enhanced-NR_resized.jpg

«ХИМФЕСТ» – особый праздник, когда химики всей страны проявляют не только чудеса учёности, но и демонстрируют высокие спортивные достижения. Это и символ сплочённости всех химиков России. На ВДНХ в этот день собралось много гостей, поскольку в нынешнем году праздник приобрел особый размах благодаря сразу двум юбилейным датам: 120-летию Минпромторга России и 60-летию празднования Дня химика в России.

DSC00424-Enhanced-NR_resized.jpg  DSC00364-Enhanced-NR_resized.jpg

На старте

На старт фестиваля «ХИМФЕСТ» вышли 17 команд из разных городов и регионов России, сотрудники ведущих предприятий, университетов, учёные и их семьи. Среди участников: Минпромторг России, АО «Щёлково Агрохим», «Росхим», «ФосАгро», «КуйбышевАзот», «Полипласт», «Пигмент», РХТУ им. Д. И. Менделеева, «Акрон», «Полипластик», «Щёкиноазот», «ЕвроХим», ГК «Август», ГК «Норкем», «РЕАТОРГ», ФГУП «ГосНИИОХТ», ГК «Арнест».

С приветственным словом к участникам феститваля «ХИМФЕСТ» обратился генеральный директор «Щёлково Агрохим» Салис Каракотов с пожеланиями новых научных и спортивных побед не только любимому коллективу, но и всем представителям отрасли.

Артур Смирнов, директор Департамента химической промышленности Министерства промышленности и торговли Российской Федерации рассказал о том, как активно развивается химическая отрасль, и открываются новые производства. «В начале этого года был запущен национальный проект «Новые материалы и химия», а вчера Президенту РФ Владимиру Путину был представлен ещё один национальный проект по химии – «Биоэкономика». Наша отрасль становится сильнее и больше, и сегодняшнее мероприятие тому подтверждение. «ХИМФЕСТ» с каждым годом объединяет всё больше предприятий химпрома».

Спорт и не только

Участники праздника соревновались в 11 дисциплинах в личном и командном зачётах, включая «Весёлые старты», силовую эстафету, стрельбу из электронного оружия, масс-рестлинг и другие.

Гостей ожидало множество интеллектуальных активностей, где химия предстала в самом ярком и захватывающем виде. Одним из наиболее зрелищных событий стал «Химический баттл» – командное соревнование между сотрудниками предприятий. Участники проводили эффектные эксперименты, например, создавали клубы цветного дыма, выращивали загадочных «фараоновых змей» и демонстрировали другие эффектные превращения химических веществ.

В «Лаборатории вкуса» шеф-повар провёл мастер-класс по молекулярной кухне. Для любителей экологии прошёл квест «Эко-химия», где команды соревновались в создании биоразлагаемого пластика и других экологичных материалов. А в «Детской лаборатории» самые маленькие гости под присмотром специалистов проводили безопасные, но не менее увлекательные эксперименты. Интеллектуалы проверили свои знания в «Научном квизе», где вопросы задавали победители химических олимпиад.


DSC00533-Enhanced-NR_resized.jpg  DSC00755-Enhanced-NR_resized.jpg

Не уронив чести

Команду «Щёлково Агрохим» представляли 14 самых спортивных коллег во главе с капитаном команды Людмилой Кравченко. Спортсмены выступили самым достойным образом и стали победителями в целых трёх видах программы. Так, Юлия Кудрявцева из отдела реализации заняла третье место в гонке на сапах на 1000 м, проявив умение отлично держать баланс, эффективно маневрировать и достигать цели. Не это ли главное в продажах?

Химический квиз был организован при поддержке химфака МГУ. Представители МГУ также развернули на площадке отдельный мастер-класс с химическими опытами по аналитической химии. Квиз предполагал углублённое знание различных разделов химии и опыт работы в химической промышленности. Потребовалась здесь и общая эрудиция. К примеру, известно, что медные монеты со временем покрываются зелёным налётом – патиной, которая является результатом химического взаимодействия с окружающей средой. А вы знаете, какое именно соединение меди образует этот зелёный слой? К.х.н. Дмитрий Рудаков из научно-технического отдела «Щёлково Агрохим» знал. И не только про патину, после того, как ты запатентовал новую химическую реакцию получения безводного оксида азота (IV), тебе подвластно все. Дмитрий и стал победителем интеллектуального квиза на химические темы.

DSC00669-Enhanced-NR_resized.jpg 

Финансовый директор «Щёлково Агрохим» Олег Аджиев, в свою очередь, занял первое место в сеансе одновременной игры в шахматы с представителем Федерации шахмат России. Это нисколько неудивительно. Ведь управление финансами как раз и заставляет мыслить на несколько ходов вперёд, предполагает тщательный анализ каждой позиции, просчёт вариантов и выбор наилучшего хода. 

Проигравших нет

«С каждым годом фестиваль «ХИМФЕСТ» становится всё шире и интереснее, отражая силу и единство нашего профессионального сообщества, – подчеркнул Виктор Иванов, президент Российского Союза химиков. – Химическая промышленность – базовая отрасль. Без неё не существовало бы всей той продукции, которую выпускают предприятия других секторов экономики. Сегодня на государственном уровне химпрому уделяется особое внимание: запускаются и реализуются масштабные химические нацпроекты, и нам предстоит решать серьёзные задачи. Я уверен, у нас всё получится. Работать в химической отрасли – это большая ответственность и большая честь. А сегодня – время для спорта, общения и хорошего настроения. На «ХИМФЕСТ» не бывает проигравших, здесь побеждают дружба, команда и любовь к делу!»

Фархад Рагимов, директор Центра опережающей подготовки и переподготовки квалифицированных кадров по направлению новых материалов и химии, поблагодарил партнёров фестиваля и отметил, что химики – это не только выдающиеся профессионалы, но и люди, которые умеют с энтузиазмом отдыхать, соревноваться и побеждать. «Каждый из вас уже победитель, потому что участвовал, старался и поддерживал своих коллег», – сказал Фархад Рагимов.

DSC01077-Enhanced-NR_resized.jpg  DSC00457-Enhanced-NR_resized.jpg

Генеральным партнёром фестиваля выступила компания СИБУР. Завершился фестиваль церемонией награждения. Победители получили призы от Минпромторга и Химического факультета МГУ.

36
Показать ещё