18.10.2017: Как это осуществляется в "Бетагран - Липецк".
 |
Дмитрий Машталер
старший эмбриолог ООО "Бетагран- Липецк"
В течении последнего времени в России уделяется существенное внимание вопросам в области воспроизводства стада и повышения уровня племенных качеств животных, так как это является краеугольным камнем в отечественном животноводстве. Однако успешное решение данных вопросов невозможно без использования современных методов и технологий, которые уже давно нашли свое применение в странах Запада.
Получение эмбрионов крупного рогатого скота методом in vitro - современный и прогрессивный биотехнологический метод, позволяющий значительно ускорить процесс воспроизводства высокопродуктивных животных. Данный метод состоит из нескольких этапов: извлечение ооцитов из антральных фолликулов яичника (OPU), созревания ооцитов (IVM - in vitro maturation); оплодотворения (IVF - in vitro fertilization) и эмбриональной культуры (IVC - in vitro culture). Важным аспектом данной технологии является то, что получать яйцеклетки от животных доноров можно как прижизненно, используя метод трансвагинальной аспирации, так и от убойного материала (яичники коров с мясокомбината). Получение разделённых по полу эмбрионов - востребованный и перспективный метод, который заключается в оплодотворении яйцеклеток сексированной спермой быков. Оплодотворение яйцеклеток разделённой по полу спермой в отличие от обычной даёт возможность получать особей желательного пола с вероятностью до 93 %. Помимо возможностей в области селекции данный метод имеет и ряд экономических преимуществ, а именно: при пересадке эмбрионов, не разделённых по полу, частота рождения бычков составляет до 55%. Что имеет немаловажное значение в молочном скотоводстве, где есть большая потребность в ремонтных тёлочках с высокой молочной продуктивностью.
Исходя из этого перед коллективом лаборатории ООО «Бетагран- Липецк» была поставлена задача направленная на создание оптимального протокола оплодотворения и культивирования доимплантированных эмбрионов in vitro. Для этого ооциткумулюсные комплексы получали прижизненно из антарльных фолликулов диаметром 2-6 мм от коров доноров методом TAU (транс вагинальной аспирации. После чего ооциткумулюсные комплексы помещались в среду дюльбекко с добавлением с 5% эстральной сыворотки, 4% р-ра гентамицина и р-ра. гепарина. Поиск и морфологическую оценку осуществляли на стереомикроскопе лабораторного класса, Olympus SZ51 при 200 кратном увеличении. Для экспериментов отбирали ооциты средней величины с мелкозернистой ооплазмой, окруженные компактным многослойным кумулюсом. Для дозревания ооцитов использовали среду 199 (Medium 199, Hepes modification, 25mM.) с добавлением 10% эстральной сыворотки крови крупного рогатого скота, Na-пирувата, BSA, 1.0 ЕД / мл лютенизирующего гормона, 10 ME/мл, фолликулостимулирующего гормона, 1,0мкг / мл эстрадиола (спиртовой раствор) и 50 мкг / мл гентамицина.
Ооциты помещали в лунки планшетов в среду созревания в объёмом 500 мкл под минеральным маслом ("Sigma", США) и культивировали в течение 20-24 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере 5 % CO2 в воздухе. Для оплодотворения использовали разделённое по полу криоконсервированное семя быков в пайэтах объёмом 0,25 мл из расчёта 1 доза на 30 яйцеклеток. Оттаивание производили при температуре + 37 º С в течении 40 секунд. По той же схеме оттаивалось и обычное семя быков. Получение подвижной фракции сперматозоидов проводили путём центрифугирования в градиенте плотности (р-р перколла) при оборотах ротора центрифуги 300G. Выход подвижных сперматозоидов при центрифугировании в градиенте плотности был больше, чем при использовании метода флотации (Swim Up). Для оплодотворения яйцеклетки перемещались в лунки со средой Fert-TALP объёмом 80 мкл. И инкубировались совместно со сперматозоидами в течении 18-20 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере с содержанием 5 % CO2.
После оплодотворения зиготы отмывали в растворе SOF и механически удаляли клетки кумулюса посредством пепетирования при помощи наконечников для денудации ооцитов диаметром 135 мкм. Очищенные зиготы помещались в среду на основе SOF c добавлением BSA, MEM vitamins, MEM Niaa, MEM iaa в лунки планшетов объёмом 500 мкл, покрытые минеральным маслом ( Sigma ,США) и культивировали при температуре 38,5º С в увлажненной атмосфере под газовой фазой (по 5% CO2 и O 2 и 90 % N2) в течение 7-8 суток. Количество оплодотворённых зигот подсчитывали через 48 и 62 часа после оплодотворения.
Для определения эффективности оплодотворения сексированной спермы использовалось заморожено-оттаянное семя пяти быков. Было оплодотворено 1050 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 944 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 89,93%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 29,42%
Таблица 1 Оплодотворяемость и выход эмбрионов сексированное семя
|
№п/п |
Бык |
∑ опл. окк |
∑ дроб. |
% от дроб |
Выход бластоцист |
% от опл. |
% от дроб. |
|
|
1 |
Маузер |
346 |
321 |
93,00% |
94 |
29,28% |
27,16% |
|
|
2 |
Мосби |
358 |
322 |
90,60% |
96 |
29,81% |
26,81% |
|
|
3 |
Коди |
121 |
107 |
88,45% |
50 |
46,72,% |
41,32% |
|
|
4 |
Бигшот |
92 |
88 |
90,88% |
32 |
36,36% |
34,78% |
|
|
5 |
Инспект |
117 |
106 |
91,55% |
37 |
34,90% |
34,90% |
|
|
итого |
1050 |
944 |
89,93% |
309 |
32,73% |
29,42% |
||
Во втором случае использовалось обычное заморожено-оттаянное семя от четырёх быков. Было оплодотворено 770 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 708 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 91,94%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 35,58%.
Таблица 2 Оплодотворяемость и выход эмбрионов обычное семя
|
№п/п |
Вид семени |
∑ опл. окк |
∑ дроб |
% от дроб |
Выход бластоцист |
% от опл. |
% от дроб |
|
1 |
Обычное |
770 |
708 |
91,94% |
274 |
38,70% |
35,58% |
|
2 |
сексированное |
1050 |
944 |
89,93% |
309 |
32,73% |
29,42% |
Таким образом сравнивая вышеперечисленные данные, можно сделать вывод, что
оплодотворяющая способность сексированного и традиционного семени не имеет
значительных расхождений.
Таблица 3 Сравнительная характеристика и эффективность использования
сексированного и традиционного семени при производстве эмбрионов in
vitro.
Так разница составила 2,01% в пользу обычного семени.
Выход эмбрионов был больше на 6,16 в пользу обычного семени. Несмотря на то,
что культивирование эмбрионов производилось на одной культуральной системе,
количество полученных эмбрионов in vitro было выше в группе, где использовалось
обычное семя. Мы предполагаем, что это связанно с окрашиванием сперматозоидов
флуоресцентной краской, из-за чего снижается энергетический запас, что и может
обуславливать меньший жизненный потенциал гамет по сравнению с обычным
семенем, как следствие - остановку развития некоторых эмбрионов.
Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что разработанный протокол оплодотворения и культуральная система обладает высоким потенциалом и позволяет получать в массовом количестве разделённые по полу эмбрионы по технологии in vitro. А также может использоваться для получения зигот и предимплантационных эмбрионов КРС in vitro для различных биотехнологических программ.
Статья взята с сайта © DairyNews.ru http://www.dairynews.ru/news/effektivnost-polucheniya-seksirovannykh-embrionov-.html
18.10.2017 0
7 июня в Москве состоялся масштабный фестиваль химии и спорта «ХИМФЕСТ», организованный Минпромторгом России и Российским Союзом химиков. Мероприятие объединило около 800 представителей химической отрасли.
«ХИМФЕСТ» – особый праздник, когда химики всей страны проявляют не только чудеса учёности, но и демонстрируют высокие спортивные достижения. Это и символ сплочённости всех химиков России. На ВДНХ в этот день собралось много гостей, поскольку в нынешнем году праздник приобрел особый размах благодаря сразу двум юбилейным датам: 120-летию Минпромторга России и 60-летию празднования Дня химика в России.
На старте
На старт фестиваля «ХИМФЕСТ» вышли 17 команд из разных городов и регионов России, сотрудники ведущих предприятий, университетов, учёные и их семьи. Среди участников: Минпромторг России, АО «Щёлково Агрохим», «Росхим», «ФосАгро», «КуйбышевАзот», «Полипласт», «Пигмент», РХТУ им. Д. И. Менделеева, «Акрон», «Полипластик», «Щёкиноазот», «ЕвроХим», ГК «Август», ГК «Норкем», «РЕАТОРГ», ФГУП «ГосНИИОХТ», ГК «Арнест».
С приветственным словом к участникам феститваля «ХИМФЕСТ» обратился генеральный директор «Щёлково Агрохим» Салис Каракотов с пожеланиями новых научных и спортивных побед не только любимому коллективу, но и всем представителям отрасли.
Артур Смирнов, директор Департамента химической промышленности Министерства промышленности и торговли Российской Федерации рассказал о том, как активно развивается химическая отрасль, и открываются новые производства. «В начале этого года был запущен национальный проект «Новые материалы и химия», а вчера Президенту РФ Владимиру Путину был представлен ещё один национальный проект по химии – «Биоэкономика». Наша отрасль становится сильнее и больше, и сегодняшнее мероприятие тому подтверждение. «ХИМФЕСТ» с каждым годом объединяет всё больше предприятий химпрома».
Спорт и не только
Участники праздника соревновались в 11 дисциплинах в личном и командном зачётах, включая «Весёлые старты», силовую эстафету, стрельбу из электронного оружия, масс-рестлинг и другие.
Гостей ожидало множество интеллектуальных активностей, где химия предстала в самом ярком и захватывающем виде. Одним из наиболее зрелищных событий стал «Химический баттл» – командное соревнование между сотрудниками предприятий. Участники проводили эффектные эксперименты, например, создавали клубы цветного дыма, выращивали загадочных «фараоновых змей» и демонстрировали другие эффектные превращения химических веществ.
В «Лаборатории вкуса» шеф-повар провёл мастер-класс по молекулярной кухне. Для любителей экологии прошёл квест «Эко-химия», где команды соревновались в создании биоразлагаемого пластика и других экологичных материалов. А в «Детской лаборатории» самые маленькие гости под присмотром специалистов проводили безопасные, но не менее увлекательные эксперименты. Интеллектуалы проверили свои знания в «Научном квизе», где вопросы задавали победители химических олимпиад.
Не уронив чести
Команду «Щёлково Агрохим» представляли 14 самых спортивных коллег во главе с капитаном команды Людмилой Кравченко. Спортсмены выступили самым достойным образом и стали победителями в целых трёх видах программы. Так, Юлия Кудрявцева из отдела реализации заняла третье место в гонке на сапах на 1000 м, проявив умение отлично держать баланс, эффективно маневрировать и достигать цели. Не это ли главное в продажах?
Химический квиз был организован при поддержке химфака МГУ. Представители МГУ также развернули на площадке отдельный мастер-класс с химическими опытами по аналитической химии. Квиз предполагал углублённое знание различных разделов химии и опыт работы в химической промышленности. Потребовалась здесь и общая эрудиция. К примеру, известно, что медные монеты со временем покрываются зелёным налётом – патиной, которая является результатом химического взаимодействия с окружающей средой. А вы знаете, какое именно соединение меди образует этот зелёный слой? К.х.н. Дмитрий Рудаков из научно-технического отдела «Щёлково Агрохим» знал. И не только про патину, после того, как ты запатентовал новую химическую реакцию получения безводного оксида азота (IV), тебе подвластно все. Дмитрий и стал победителем интеллектуального квиза на химические темы.
Финансовый директор «Щёлково Агрохим» Олег Аджиев, в свою очередь, занял первое место в сеансе одновременной игры в шахматы с представителем Федерации шахмат России. Это нисколько неудивительно. Ведь управление финансами как раз и заставляет мыслить на несколько ходов вперёд, предполагает тщательный анализ каждой позиции, просчёт вариантов и выбор наилучшего хода.
Проигравших нет
«С каждым годом фестиваль «ХИМФЕСТ» становится всё шире и интереснее, отражая силу и единство нашего профессионального сообщества, – подчеркнул Виктор Иванов, президент Российского Союза химиков. – Химическая промышленность – базовая отрасль. Без неё не существовало бы всей той продукции, которую выпускают предприятия других секторов экономики. Сегодня на государственном уровне химпрому уделяется особое внимание: запускаются и реализуются масштабные химические нацпроекты, и нам предстоит решать серьёзные задачи. Я уверен, у нас всё получится. Работать в химической отрасли – это большая ответственность и большая честь. А сегодня – время для спорта, общения и хорошего настроения. На «ХИМФЕСТ» не бывает проигравших, здесь побеждают дружба, команда и любовь к делу!»
Фархад Рагимов, директор Центра опережающей подготовки и переподготовки квалифицированных кадров по направлению новых материалов и химии, поблагодарил партнёров фестиваля и отметил, что химики – это не только выдающиеся профессионалы, но и люди, которые умеют с энтузиазмом отдыхать, соревноваться и побеждать. «Каждый из вас уже победитель, потому что участвовал, старался и поддерживал своих коллег», – сказал Фархад Рагимов.
Генеральным партнёром фестиваля выступила компания СИБУР. Завершился фестиваль церемонией награждения. Победители получили призы от Минпромторга и Химического факультета МГУ.