RUS
ENG
RUS
ENG
Мобильное
приложение
Обратная
связь
+7 (495) 745-05-51

Эффективность получения сексированных эмбрионов КРС методом in vitro

18.10.2017: Как это осуществляется в "Бетагран - Липецк".


Дмитрий Машталер
старший эмбриолог ООО "Бетагран- Липецк"

В течении последнего времени в России уделяется существенное внимание вопросам в области воспроизводства стада и повышения уровня племенных качеств животных, так как это является краеугольным камнем в отечественном животноводстве. Однако успешное решение данных вопросов невозможно без использования современных методов и технологий, которые уже давно нашли свое применение в странах Запада.

Получение эмбрионов крупного рогатого скота методом in vitro - современный и прогрессивный биотехнологический метод, позволяющий значительно ускорить процесс воспроизводства высокопродуктивных животных. Данный метод состоит из нескольких этапов: извлечение ооцитов из антральных фолликулов яичника (OPU), созревания ооцитов (IVM - in vitro maturation); оплодотворения (IVF - in vitro fertilization) и эмбриональной культуры (IVC - in vitro culture). Важным аспектом данной технологии является то, что получать яйцеклетки от животных доноров можно как прижизненно, используя метод трансвагинальной аспирации, так и от убойного материала (яичники коров с мясокомбината). Получение разделённых по полу эмбрионов - востребованный и перспективный метод, который заключается в оплодотворении яйцеклеток сексированной спермой быков. Оплодотворение яйцеклеток разделённой по полу спермой в отличие от обычной даёт возможность получать особей желательного пола с вероятностью до 93 %. Помимо возможностей в области селекции данный метод имеет и ряд экономических преимуществ, а именно: при пересадке эмбрионов, не разделённых по полу, частота рождения бычков составляет до 55%. Что имеет немаловажное значение в молочном скотоводстве, где есть большая потребность в ремонтных тёлочках с высокой молочной продуктивностью.

Исходя из этого перед коллективом лаборатории ООО «Бетагран- Липецк» была поставлена задача направленная на создание оптимального протокола оплодотворения и культивирования доимплантированных эмбрионов in vitro. Для этого ооциткумулюсные комплексы получали прижизненно из антарльных фолликулов диаметром 2-6 мм от коров доноров методом TAU (транс вагинальной аспирации. После чего ооциткумулюсные комплексы помещались в среду дюльбекко с добавлением с 5% эстральной сыворотки, 4% р-ра гентамицина и р-ра. гепарина. Поиск и морфологическую оценку осуществляли на стереомикроскопе лабораторного класса, Olympus SZ51 при 200 кратном увеличении. Для экспериментов отбирали ооциты средней величины с мелкозернистой ооплазмой, окруженные компактным многослойным кумулюсом. Для дозревания ооцитов использовали среду 199 (Medium 199, Hepes modification, 25mM.) с добавлением 10% эстральной сыворотки крови крупного рогатого скота, Na-пирувата, BSA, 1.0 ЕД / мл лютенизирующего гормона, 10 ME/мл, фолликулостимулирующего гормона, 1,0мкг / мл эстрадиола (спиртовой раствор) и 50 мкг / мл гентамицина.

Ооциты помещали в лунки планшетов в среду созревания в объёмом 500 мкл под минеральным маслом ("Sigma", США) и культивировали в течение 20-24 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере 5 % CO2 в воздухе. Для оплодотворения использовали разделённое по полу криоконсервированное семя быков в пайэтах объёмом 0,25 мл из расчёта 1 доза на 30 яйцеклеток. Оттаивание производили при температуре + 37 º С в течении 40 секунд. По той же схеме оттаивалось и обычное семя быков. Получение подвижной фракции сперматозоидов проводили путём центрифугирования в градиенте плотности (р-р перколла) при оборотах ротора центрифуги 300G. Выход подвижных сперматозоидов при центрифугировании в градиенте плотности был больше, чем при использовании метода флотации (Swim Up). Для оплодотворения яйцеклетки перемещались в лунки со средой Fert-TALP объёмом 80 мкл. И инкубировались совместно со сперматозоидами в течении 18-20 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере с содержанием 5 % CO2.

После оплодотворения зиготы отмывали в растворе SOF и механически удаляли клетки кумулюса посредством пепетирования при помощи наконечников для денудации ооцитов диаметром 135 мкм. Очищенные зиготы помещались в среду на основе SOF c добавлением BSA, MEM vitamins, MEM Niaa, MEM iaa в лунки планшетов объёмом 500 мкл, покрытые минеральным маслом ( Sigma ,США) и культивировали при температуре 38,5º С в увлажненной атмосфере под газовой фазой (по 5% CO2 и O 2 и 90 % N2) в течение 7-8 суток. Количество оплодотворённых зигот подсчитывали через 48 и 62 часа после оплодотворения.

Для определения эффективности оплодотворения сексированной спермы использовалось заморожено-оттаянное семя пяти быков. Было оплодотворено 1050 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 944 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 89,93%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 29,42%

Таблица 1 Оплодотворяемость и выход эмбрионов сексированное семя

№п/п

Бык

∑ опл. окк

∑ дроб.

% от дроб

Выход бластоцист

% от опл.

% от дроб.

1

Маузер

346

321

93,00%

94

29,28%

27,16%

2

Мосби

358

322

90,60%

96

29,81%

26,81%

3

Коди

121

107

88,45%

50

46,72,%

41,32%

4

Бигшот

92

88

90,88%

32

36,36%

34,78%

5

Инспект

117

106

91,55%

37

34,90%

34,90%

итого

1050

944

89,93%

309

32,73%

29,42%

Во втором случае использовалось обычное заморожено-оттаянное семя от четырёх быков. Было оплодотворено 770 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 708 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 91,94%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 35,58%.

Таблица 2 Оплодотворяемость и выход эмбрионов обычное семя

№п/п

Вид семени

∑ опл. окк

∑ дроб

% от дроб

Выход бластоцист

% от опл.

% от дроб

1

Обычное

770

708

91,94%

274

38,70%

35,58%

2

сексированное

1050

944

89,93%

309

32,73%

29,42%


Таким образом сравнивая вышеперечисленные данные, можно сделать вывод, что оплодотворяющая способность сексированного и традиционного семени не имеет значительных расхождений.


Таблица 3 Сравнительная характеристика и эффективность использования сексированного и традиционного семени при производстве эмбрионов in vitro.


Так разница составила 2,01% в пользу обычного семени. Выход эмбрионов был больше на 6,16 в пользу обычного семени. Несмотря на то, что культивирование эмбрионов производилось на одной культуральной системе, количество полученных эмбрионов in vitro было выше в группе, где использовалось обычное семя. Мы предполагаем, что это связанно с окрашиванием сперматозоидов флуоресцентной краской, из-за чего снижается энергетический запас, что и может обуславливать меньший жизненный потенциал гамет по сравнению с обычным семенем, как следствие - остановку развития некоторых эмбрионов.

Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что разработанный протокол оплодотворения и культуральная система обладает высоким потенциалом и позволяет получать в массовом количестве разделённые по полу эмбрионы по технологии in vitro. А также может использоваться для получения зигот и предимплантационных эмбрионов КРС in vitro для различных биотехнологических программ.

Статья взята с сайта © DairyNews.ru http://www.dairynews.ru/news/effektivnost-polucheniya-seksirovannykh-embrionov-.html

18.10.2017 0
31.10.2025
Совка и щирица атакуют Белгородчину – решение есть

Ещё 4 года назад о хлопковой совке аграрии Белгородской области слышали только от коллег из Краснодарского края. Сейчас же этот злостный вредитель появляется в регионе повсеместно, нанося существенный урон местным земледельцам. В этом сезоне проблем аграриям добавила и щирица – резистентный сорняк, который очень сложно вывести. Специалисты Белгородского представительства «Щёлково Агрохим» нашли рецепт спасения урожая.

shutterstock_2218835151.jpg


Пограничное земледелие

Зелёные чистые поля сои всё лето радуют глаз фермера Геннадия Чумака, который уже более 20 лет занимается земледелием в родных краях – Вейделевском районе Белгородской области. Район сложный в разных отношениях. Это юго-восток области, очень засушливый район, зона рискованного земледелия. Сложностей добавляет и географическое расположение близость к зоне проведения СВО. Геннадий Николаевич в родном колхозе имени Ленина трудился сначала механиком, потом – управляющим участка. Когда колхоз прекратил существование, решил заниматься сельским хозяйством самостоятельно.

«За долгие годы работы в колхозе получил аграрный опыт, при этом было желание заниматься этим делом и дальше, стал пробовать, – рассказывает фермер. – Начинал с 200 гектаров, сейчас возделываю зерновые культуры, сою, подсолнечник и кукурузу на 2000 гектарах. Занимался сахарной свёклой, а сейчас упор делаем на возделывание сои, под которую выделено 500 гектаров. Также занимаемся выращиванием подсолнечника (300 гектаров), озимой пшеницы (600 гектаров), ячменя и кукурузы».

WhatsApp Image 2025-09-05 at 12.58.08.jpeg
Геннадий Чумак – фермер, глава ИП

База ИП Чумак Геннадий Николаевич расположилась в старинном селе Яропольцы, которое соседствует с селом Клименки. Яропольцы когда-то было большим селом со своим родильным домом. В здешнем хозяйстве держали овец, коров и даже табун лошадей в 80 голов. Постепенно население стало редеть. Но патриоты не дают сёлам и землям пустовать. Между чудесных живописных прудов, у двух сёл – Яропольцы и Клименки, расположены земли ИП Чумака, в котором трудится около 15 человек. С компанией «Щёлково Агрохим» фермер работает уже более 10 лет. С главой Белгородского представительства Сергеем Гороховым сложились тёплые, дружеские отношения. Как говорит Геннадий Чумак, «с таким человеком можно смело идти в огонь и в воду». Такое доверие базируется не только на человеческих качествах главы представительства, но и на эффективности продуктов «Щёлково Агрохим», которые за многие годы спасли фермеру десятки тысяч центнеров урожая.

«Посмотрите на поля – соя изумительная! Крепкие и здоровые растения! – говорит Геннадий Чумак. – Как не доверять, когда своими глазами много лет вижу результат! В этом сезоне было немало проблем, погодные условия расслабиться не давали: весенние заморозки, обилие осадков, которые сменяла засуха, прохладная погода… От нового вредителя – хлопковой совки, казалось, не будет никакого спасения. Но я очень доволен, что компания «Щёлково Агрохим» сохранила мои поля и урожай».

WhatsApp Image 2025-09-09 at 10.55.33 (1).jpeg
Соя в ранних фазах на полях ИП Чумака

Когда знаешь, кто поможет

Заместитель главы Белгородского представительства Ярослав Филимонов работает с ИП Чумак Геннадий Николаевич уже много лет.

«Последние 3 года Геннадий Николаевич тесно занимается соей, в этом году вышли на 100% защиты сои препаратами «Щёлково Агрохим», – рассказывает специалист. – В схеме этого сезона была и протравка семян, и гербицидная защита, и защита против вредителей, и подкормки микроудобрениями. При протравке семян сои мы применили наш фунгицидный протравитель ДЕПОЗИТ СУПРИМ, МЭ, используя его в максимальной норме. Также обязателен инсектицидный протравитель ИМИДОР ПРО, КС. Дополнительно применили ГУМАТ КАЛИЯ СУФЛЁР (0,7 л/т). Таким образом, ДЕПОЗИТ СУПРИМ, МЭ защитил сою от заболеваний, ИМИДОР ПРО, КС – от потенциальных вредителей. В последние годы в нашем регионе часто встречается такой вредитель, как ростковая муха, которая уже на всходах поражает культуру, соответственно снижается густота растений. Отмечу, этот вредитель может уничтожить до половины всходов. А теперь, когда к традиционным вредителям добавилась и хлопковая совка, без инсектицидных продуктов не обойтись, как раньше».

WhatsApp Image 2025-09-15 at 09.44.10.jpeg
Ярослав Филимонов - заместитель главы Белгородского представительства АО «Щёлково Агрохим»

Дальше начинаются обработки по вегетации. В текущем сезоне для обработок по вегетации была подобрана мягкая схема защиты. В первую обработку применили высокоэффективный контактный послевсходовый гербицид для контроля однолетних двудольных сорняков БЕНИТО, ККР (2,5 л/га), во вторую обработку – послевсходовый системный гербицид КУПАЖ, ВДГ. В эту же схему добавили прилипатель АССИСТЕНТ, чтобы повысить активность гербицидов.

«В последние 2-3 года в эту схему добавляем довсходовый гербицид с длительным почвенным действием ГАЛС, КЭ по вегетации, потому что у этого фермера есть проблемы с падалицей подсолнечника, – добавляет Ярослав Филимонов. – Кломазон в составе этого продукта отлично борется с падалицей подсолнечника, дополняя действие бентазоновых гербицидов, увеличивая их синергизм. Вот эта тройка БЕНИТО, ККР + КУПАЖ, ВДГ + ГАЛС, КЭ – замечательный рецепт в борьбе с падалицей подсолнечника, марью и щирицей. Данной схемой в этом сезоне мы проводили обработку дважды. Но в целом смотрим по состоянию сорной растительности. Например, в прошлом году мы обошлись без дополнительной обработки, а нынче из-за осадков и прохладной погоды решили подстраховаться и дважды обработали все посевы этой схемой. Фермер доволен – посевы идеальные».

После двух обработок по двудольным сорнякам в хозяйстве провели противозлаковую обработку гербицидом ЦЕНЗОР, КЭ, к которому добавили комбинированный инсектоакарицид КИНФОС, КЭ, чтобы сдержать размножение такого опасного вредителя сои, как бабочка-репейница.

В период цветения сои провели обработку жидким боросодержащим микроудобрением УЛЬТРАМАГ БОР и УЛЬТРАМАГ КОМБИ ДЛЯ МАСЛИЧНЫХ, в критическую фазу бутонизации, когда закладывается база под будущие бобы.

WhatsApp Image 2025-09-09 at 10.53.19 (2).jpeg
Состояние сои на 20.08.2025

ЮНОНА – оружие против совки

Хлопковая совка в Белгородской области появилась в 2022 года. Замглавы Белгородского представительства «Щёлково Агрохим» Ярослав Филимонов называет этого вредителя главной головной болью местных земледельцев: пропустишь фазу – потеряешь урожай.

«Примерно с 15 июля и до конца августа мы наблюдаем лёт бабочки, – рассказывает он. – Против этой беды мы уже второй сезон в ИП Чумака дополнительно проводим обработку инсектицидом контактно-кишечного действия ЮНОНА, МЭ (0,4 л/га). Геннадий Николаевич очень доволен этим продуктом. Это мощный инсектицид, обеспечивающий гибель гусениц не только первого-второго возраста, но и крупных, которых традиционные инсектициды не берут. Здесь максимально важно не допустить массового распространения вредителя, когда гусеница начинает питаться уже цветками и молодыми зёрнами в бобах, а не только листьями. Необходимо быть начеку, так как хлопковая совка может уничтожить весь урожай. Так в 2022 году, когда мы с ней столкнулись в первый раз, в некоторых отделениях одного белгородского крупного холдинга урожай сои был уничтожен совкой до 90%! Хлопковая совка очень устойчива к обычным и традиционным инсектицидам, а ЮНОНА, МЭ имеет 95% эффективности по данному вредителю».

Сам фермер Геннадий Чумак называет совку настоящим кошмаром для земледельцев. Чем только ни боролись с этим вредителем! Испробованы десятки инсектицидов и различных схем – эффект нулевой.

«Сейчас я уже не переживаю, отработали инсектицидом ЮНОНА, МЭ и о совке не вспоминаем, – говорит фермер. – Очень достойный препарат!»

Щирица не приговор

В Белгородском представительстве научились работать с таким сорняком, как щирица запрокинутая, которая приобрела резистентность ко многим гербицидам. В последние 2 года сорняк стал представлять большую опасность для полей в Белгородской области: чуть фазу упустишь, сорняк перерастёт, и его очень сложно уничтожить. Гербициды чуть прижгут сорняк, но после осадков щирица снова начинает ветвиться, разрастаться. Да, по ранним фазам развития этого сорного растения отлично работает вышеупомянутая схема БЕНИТО, ККР + КУПАЖ, ВДГ + ГАЛС, КЭ, но что делать, если щирица перерастает?

shutterstock_2656108749.jpg
Переросшую щирицу смогли одолеть с помощью послевсходового гербицида ТАНТО, ККР с ацифлуорфеном

«В этом году наблюдали переросшую щирицу в одном из крупных холдингов, – рассказывает Ярослав Филимонов. – Зрелище впечатляющее… Мы смогли одолеть её с помощью послевсходового гербицида ТАНТО, ККР с ацифлуорфеном. Важно подобрать дозировку этого продукта, при которой соя не будет угнетаться, а злостный сорняк будет эффективно подавляться. Кстати, в следующем сезоне проведём опыт с ТАНТО, ККР и у Геннадия Чумака. Цель – уйти от повторных обработок сои, выйдя на одну. Площади по этой культуре в регионе существенно увеличились, при этом соя требует к себе повышенного внимания, особой щепетильности, не меньшей, чем в защите другой нежной культуры – сахарной свёклы. Если мы несвоевременно обработаем сою, она, как и сахарная свёкла, закрывает междурядья, что осложняет обработки. Выходит, что, упустив сроки, мы потом угнетаем сою повышенными нормами гербицидов, но при этом очень слабо поборемся с самими сорняками».

Навстречу новым сортам

На сое Геннадий Николаевич на 100% работает с препаратами «Щёлково Агрохим», доверяя компании и специалистам безоглядно. А в будущем году фермер будет закладывать опытные участки с сортами сои селекции «Щёлково Агрохим». Совсем недавно он вернулся с международного осеннего АгроФестиваля Вetaren-2025, прошедшего на базе сельхозпредприятия «Дубовицкое» в Орловской области. Там были представлены новейшие сорта сои селекции «Щёлково Агрохим»: СамЕЦ, Бинго, Тейри, Лада СД и другие – есть из чего выбирать.

«В предстоящем сезоне хочу попробовать несколько сортов сои и озимой пшеницы селекции «Щёлково Агрохим», – рассказывает фермер. – Будем ставить демонстрационные опыты, сравнивать с сортами хозяйства. Очень привлекают такие сорта озимой пшеницы, как Ермоловка и Зюгановка, присматриваюсь, есть желание испытать. Хотя есть нюансы: наше хозяйство расположено на юго-востоке Белгородской области, где выпадает 250-300 мм осадков в год, в отличие от 600 мм в Орловской области, где располагается опытное хозяйство «Щёлково Агрохим». Но я уверен, компании есть что нам предложить и в этой ситуации!»

Замглавы Белгородского представительства Ярослав Филимонов считает, несмотря на то, что на Белгородчине имеется очень сильный краснодарский клин сортов озимой пшеницы, щёлковские сорта в здешних условиях могут показывать не менее достойные результаты, и опытные участки с нашими схемами защиты этой культуры в ИП Чумака будут заложены непременно.

«Наша задача – показать, что мы эффективнее, что наши решения по защите пшеницы лучше, чем у других компаний, что наши сорта высокоурожайны, – говорит Ярослав. – Уже сейчас заключён договор с хозяйством о закладке в следующем году участков со схемами защиты «Щёлково Агрохим» на озимой пшенице (сейчас в ИП Чумак на озимой пшенице применяются СЗР другой компании). Рассматривает Геннадий Николаевич и постепенное внедрение наших сортов и гибридов».

Был бы мир да урожай

Фермер Геннадий Чумак любит и ценит родные места. Для него, как и для всех селян, сбор урожая – это священный труд и великий праздник, который, как водится, отмечают всем селом. Радеет Геннадий Николаевич и за качество жизни односельчан: летом обязательно обкашивает общественные территории, реализует продукцию и зерно местным жителям по льготным ценам, организует праздники, ремонтирует местный ФАП.

«Места у нас очень красивые: три пруда вокруг деревни, хорошие места для охоты и рыбалки. Но эти развлечения для нас доступны только зимой – сейчас трудимся денно и нощно. В будущем году планируем ввести в эксплуатацию большой зерноочистительный комплекс и сушилку для зерна, которая так необходима в неустойчивом климате юго-востока области, – рассказывает о планах фермер. – Уже активно ведётся стройка, обустраиваются подъездные пути. Живём и работаем – был бы мир да урожай!»

25
Показать ещё