18.10.2017: Как это осуществляется в "Бетагран - Липецк".
 |
Дмитрий Машталер
старший эмбриолог ООО "Бетагран- Липецк"
В течении последнего времени в России уделяется существенное внимание вопросам в области воспроизводства стада и повышения уровня племенных качеств животных, так как это является краеугольным камнем в отечественном животноводстве. Однако успешное решение данных вопросов невозможно без использования современных методов и технологий, которые уже давно нашли свое применение в странах Запада.
Получение эмбрионов крупного рогатого скота методом in vitro - современный и прогрессивный биотехнологический метод, позволяющий значительно ускорить процесс воспроизводства высокопродуктивных животных. Данный метод состоит из нескольких этапов: извлечение ооцитов из антральных фолликулов яичника (OPU), созревания ооцитов (IVM - in vitro maturation); оплодотворения (IVF - in vitro fertilization) и эмбриональной культуры (IVC - in vitro culture). Важным аспектом данной технологии является то, что получать яйцеклетки от животных доноров можно как прижизненно, используя метод трансвагинальной аспирации, так и от убойного материала (яичники коров с мясокомбината). Получение разделённых по полу эмбрионов - востребованный и перспективный метод, который заключается в оплодотворении яйцеклеток сексированной спермой быков. Оплодотворение яйцеклеток разделённой по полу спермой в отличие от обычной даёт возможность получать особей желательного пола с вероятностью до 93 %. Помимо возможностей в области селекции данный метод имеет и ряд экономических преимуществ, а именно: при пересадке эмбрионов, не разделённых по полу, частота рождения бычков составляет до 55%. Что имеет немаловажное значение в молочном скотоводстве, где есть большая потребность в ремонтных тёлочках с высокой молочной продуктивностью.
Исходя из этого перед коллективом лаборатории ООО «Бетагран- Липецк» была поставлена задача направленная на создание оптимального протокола оплодотворения и культивирования доимплантированных эмбрионов in vitro. Для этого ооциткумулюсные комплексы получали прижизненно из антарльных фолликулов диаметром 2-6 мм от коров доноров методом TAU (транс вагинальной аспирации. После чего ооциткумулюсные комплексы помещались в среду дюльбекко с добавлением с 5% эстральной сыворотки, 4% р-ра гентамицина и р-ра. гепарина. Поиск и морфологическую оценку осуществляли на стереомикроскопе лабораторного класса, Olympus SZ51 при 200 кратном увеличении. Для экспериментов отбирали ооциты средней величины с мелкозернистой ооплазмой, окруженные компактным многослойным кумулюсом. Для дозревания ооцитов использовали среду 199 (Medium 199, Hepes modification, 25mM.) с добавлением 10% эстральной сыворотки крови крупного рогатого скота, Na-пирувата, BSA, 1.0 ЕД / мл лютенизирующего гормона, 10 ME/мл, фолликулостимулирующего гормона, 1,0мкг / мл эстрадиола (спиртовой раствор) и 50 мкг / мл гентамицина.
Ооциты помещали в лунки планшетов в среду созревания в объёмом 500 мкл под минеральным маслом ("Sigma", США) и культивировали в течение 20-24 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере 5 % CO2 в воздухе. Для оплодотворения использовали разделённое по полу криоконсервированное семя быков в пайэтах объёмом 0,25 мл из расчёта 1 доза на 30 яйцеклеток. Оттаивание производили при температуре + 37 º С в течении 40 секунд. По той же схеме оттаивалось и обычное семя быков. Получение подвижной фракции сперматозоидов проводили путём центрифугирования в градиенте плотности (р-р перколла) при оборотах ротора центрифуги 300G. Выход подвижных сперматозоидов при центрифугировании в градиенте плотности был больше, чем при использовании метода флотации (Swim Up). Для оплодотворения яйцеклетки перемещались в лунки со средой Fert-TALP объёмом 80 мкл. И инкубировались совместно со сперматозоидами в течении 18-20 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере с содержанием 5 % CO2.
После оплодотворения зиготы отмывали в растворе SOF и механически удаляли клетки кумулюса посредством пепетирования при помощи наконечников для денудации ооцитов диаметром 135 мкм. Очищенные зиготы помещались в среду на основе SOF c добавлением BSA, MEM vitamins, MEM Niaa, MEM iaa в лунки планшетов объёмом 500 мкл, покрытые минеральным маслом ( Sigma ,США) и культивировали при температуре 38,5º С в увлажненной атмосфере под газовой фазой (по 5% CO2 и O 2 и 90 % N2) в течение 7-8 суток. Количество оплодотворённых зигот подсчитывали через 48 и 62 часа после оплодотворения.
Для определения эффективности оплодотворения сексированной спермы использовалось заморожено-оттаянное семя пяти быков. Было оплодотворено 1050 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 944 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 89,93%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 29,42%
Таблица 1 Оплодотворяемость и выход эмбрионов сексированное семя
|
№п/п |
Бык |
∑ опл. окк |
∑ дроб. |
% от дроб |
Выход бластоцист |
% от опл. |
% от дроб. |
|
|
1 |
Маузер |
346 |
321 |
93,00% |
94 |
29,28% |
27,16% |
|
|
2 |
Мосби |
358 |
322 |
90,60% |
96 |
29,81% |
26,81% |
|
|
3 |
Коди |
121 |
107 |
88,45% |
50 |
46,72,% |
41,32% |
|
|
4 |
Бигшот |
92 |
88 |
90,88% |
32 |
36,36% |
34,78% |
|
|
5 |
Инспект |
117 |
106 |
91,55% |
37 |
34,90% |
34,90% |
|
|
итого |
1050 |
944 |
89,93% |
309 |
32,73% |
29,42% |
||
Во втором случае использовалось обычное заморожено-оттаянное семя от четырёх быков. Было оплодотворено 770 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 708 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 91,94%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 35,58%.
Таблица 2 Оплодотворяемость и выход эмбрионов обычное семя
|
№п/п |
Вид семени |
∑ опл. окк |
∑ дроб |
% от дроб |
Выход бластоцист |
% от опл. |
% от дроб |
|
1 |
Обычное |
770 |
708 |
91,94% |
274 |
38,70% |
35,58% |
|
2 |
сексированное |
1050 |
944 |
89,93% |
309 |
32,73% |
29,42% |
Таким образом сравнивая вышеперечисленные данные, можно сделать вывод, что
оплодотворяющая способность сексированного и традиционного семени не имеет
значительных расхождений.
Таблица 3 Сравнительная характеристика и эффективность использования
сексированного и традиционного семени при производстве эмбрионов in
vitro.
Так разница составила 2,01% в пользу обычного семени.
Выход эмбрионов был больше на 6,16 в пользу обычного семени. Несмотря на то,
что культивирование эмбрионов производилось на одной культуральной системе,
количество полученных эмбрионов in vitro было выше в группе, где использовалось
обычное семя. Мы предполагаем, что это связанно с окрашиванием сперматозоидов
флуоресцентной краской, из-за чего снижается энергетический запас, что и может
обуславливать меньший жизненный потенциал гамет по сравнению с обычным
семенем, как следствие - остановку развития некоторых эмбрионов.
Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что разработанный протокол оплодотворения и культуральная система обладает высоким потенциалом и позволяет получать в массовом количестве разделённые по полу эмбрионы по технологии in vitro. А также может использоваться для получения зигот и предимплантационных эмбрионов КРС in vitro для различных биотехнологических программ.
Статья взята с сайта © DairyNews.ru http://www.dairynews.ru/news/effektivnost-polucheniya-seksirovannykh-embrionov-.html
18.10.2017 0
Мировой рекорд, «Диалог профессионалов», технология спидбридинга, современная российская селекция, инновации в области средств защиты растений, лидерство и технологичность: всё это – «ключевые слова», которыми можно описать участие компании «Щёлково Агрохим» в 32-й Международной сельскохозяйственной выставке «ЮГАГРО-2025».
Выставка «ЮГАГРО-2025», которая традиционно проходит в Краснодаре, – это возможность подвести черту под уходящим годом и представить всему аграрному сообществу планы на следующий год.
В первый день работы выставки, во время пленарного заседания, на котором присутствовали представители власти, учёные и сельхозпроизводители, компании «Щёлково Агрохим» был вручён официальный сертификат Книги рекордов России за установление мирового рекорда.
Формулировка выдающегося достижения – за «Наибольшее количество зарегистрированных рекордов по урожайности и продуктивности сельхозкультур, установленных одной агрокомпанией за последние пять лет». Напомним, за столь короткий период компания зафиксировала 7 (!!!) официально зарегистрированных рекордов по урожайности и продуктивности озимой пшеницы и сои.
«Каждый должен стремиться к преодолению своих возможностей. «Щёлково Агрохим» – химическая компания, но мы привнесли в растениеводство технологии. В совокупности – селекция, технология и люди – способны создавать такие рекорды», – заявил на церемонии вручения Салис Каракотов. И добавил, что компания продолжит работу над новыми рекордами.
О российской селекции и инновационных технологиях Салис Добаевич рассказал министру сельского хозяйства РФ Оксане Лут, которая посетила стенд «Щёлково Агрохим». Здесь была представлена инсталляция с растениями подсолнечника, сои, кукурузы, пшеницы и гороха, выращенными в специальных климатических камерах по технологии «спидбридинг» – ускоренной селекции. Такой подход позволяет получать 6-7 поколений растений в год: это более чем в два раза ускоряет создание новых сортов и гибридов. Вдохновившись перспективами технологии, в 2025 году компания «Щёлково Агрохим» открыла первый и единственный в России комплекс спидбридинга и испытаний агрохимии.
Для того чтобы каждое хозяйство могло расти над собой, устанавливая собственные рекорды, на стенде «Щёлково Агрохим» практически в режиме «нон-стоп» работал уникальный лекторий «Академия роста». Здесь в качестве спикеров выступали специалисты компании.
На семинаре «Путь к рекордам» эксперты раскрыли технологические секреты, позволившие получить рекордные урожаи озимой пшеницы и сои. На практикуме «Биология сада» представили технологии, которые помогают сохранить урожай и прибыль даже в условиях стремительно меняющегося климата. На семинаре «Абсолютный VIN!» рассказали о «must have» для защиты винограда в условиях юга России.
Во второй день работы выставки компания провела круглый стол «Диалог профессионалов». В центре внимания оказались масличные культуры: неудивительно, ведь они держат на плаву экономику многих российских хозяйств. Отрасль откликается на благоприятную конъюнктуру рынка ростом площадей. Так, посевные площади под подсолнечником за последнюю пятилетку увеличились на 5 млн гектаров. Однако более 80% посевов данной культуры остаются без фунгицидной защиты. А хозяйства – без сохранённого урожая и дополнительной прибыли.
Салис Каракотов привёл детальную экономическую раскладку, которая показывает: прибыль, полученная в результате применения фунгицидов на подсолнечнике, варьирует в пределах 6,3–18,9 тыс. рублей на гектар. Причём, окупаемая прибавка фиксируется даже в засушливых условиях: об этом говорят результаты многочисленных демонстрационных опытов, заложенных в разных регионах страны.
Участники «Диалога профессионалов» получили не только актуальную информацию, убедительные цифры и ценные рекомендации. Компания «Щёлково Агрохим» провела розыгрыш ценных призов. Главный приз – Apple iPad Pro 13" – выиграл Александр Дмитриенко – представитель Агрохолдинга «СТЕПЬ», который, между прочим, является её давним и надёжным партнёром. Такое совпадение говорит об одном: те, кто сотрудничает со «Щёлково Агрохим», всегда остаются в выигрыше!
Но розыгрышу – час, а делу – время. Обсуждение эффективных технологий продолжилось на семинаре «Воздушная атака на болезни». Специалисты доказали, что внесение фунгицидов с помощью беспилотных систем – это эффективно, перспективно, рентабельно. Данный факт подтверждает один из опытов, заложенных в 2025 году на гибриде подсолнечника Кречет. Максимальная урожайность – 26,66 ц/га – была зафиксирована на варианте с дроном-опрыскивателем. Это почти на 5,7 ц/га больше, чем на контрольном участке, где обработки не проводились. Таким образом, фунгицидная защита с использованием БАС принесла хозяйству дополнительную прибыль в размере 15,2 тыс. рублей с каждого гектара!
Работать точней, быстрей и эффективней современным земледельцам помогают мобильные приложения и сервисы. О них эксперты «Щёлково Агрохим» рассказали в рамках семинара «Мобильные инструменты агронома».
Дефицит специалистов и способы привлечения молодёжи в АПК – одна из «болевых точек» отрасли. Эта тема стала ключевой в пленарном заседании «Будущее села: как обеспечить сельское хозяйство Юга России квалифицированными кадрами». Участие в нём приняли вице-губернатор Краснодарского края Андрей Коробка, ректор КубГАУ Александр Трубилин, региональный руководитель «Россельхозбанка» Евгений Ковалев и другие эксперты.
О работе «Щёлково Агрохим» в данном направлении рассказал Салис Каракотов. В том числе, компания реализует проект «Бетарен Академия». Победители конкурса студенческих работ получают не только единоразовую выплату и ежемесячную именную стипендию, но и возможность пройти практику под руководством опытных специалистов и стать частью суперэффективной команды.
Пока эксперты обсуждали способы привлечения молодых людей в отрасль, на стенде «Щёлково Агрохим» шла серия увлекательных квестов «Успешными специалистами становятся вместе со «Щёлково Агрохим». Здесь студенты аграрных вузов больше узнали о проекте «Бетарен Академия», отвечали на профессиональные вопросы и выигрывали призы.
Четыре дня работы выставки «ЮГАГРО-2025» пролетели незаметно. На протяжении этого времени на стенде работала видеостудия, в которой велись записи подкастов «Бетарен Практика». Среди гостей – известные учёные, аграрии, а также представители «Щёлково Агрохим», включая Салиса Каракотова. Среди тем, которые обсудили эксперты, - современные технологии защиты растений, преимущества российской селекции, борьба с фальсифицированными семенами, цифровизация отрасли, новые точки роста маржинальности и многое другое. Следите за новыми выпусками подкастов «Бетарен Практика», будьте со «Щёлково Агрохим»!