18.10.2017: Как это осуществляется в "Бетагран - Липецк".
|
Дмитрий Машталер
старший эмбриолог ООО "Бетагран- Липецк"
В течении последнего времени в России уделяется существенное внимание вопросам в области воспроизводства стада и повышения уровня племенных качеств животных, так как это является краеугольным камнем в отечественном животноводстве. Однако успешное решение данных вопросов невозможно без использования современных методов и технологий, которые уже давно нашли свое применение в странах Запада.
Получение эмбрионов крупного рогатого скота методом in vitro - современный и прогрессивный биотехнологический метод, позволяющий значительно ускорить процесс воспроизводства высокопродуктивных животных. Данный метод состоит из нескольких этапов: извлечение ооцитов из антральных фолликулов яичника (OPU), созревания ооцитов (IVM - in vitro maturation); оплодотворения (IVF - in vitro fertilization) и эмбриональной культуры (IVC - in vitro culture). Важным аспектом данной технологии является то, что получать яйцеклетки от животных доноров можно как прижизненно, используя метод трансвагинальной аспирации, так и от убойного материала (яичники коров с мясокомбината). Получение разделённых по полу эмбрионов - востребованный и перспективный метод, который заключается в оплодотворении яйцеклеток сексированной спермой быков. Оплодотворение яйцеклеток разделённой по полу спермой в отличие от обычной даёт возможность получать особей желательного пола с вероятностью до 93 %. Помимо возможностей в области селекции данный метод имеет и ряд экономических преимуществ, а именно: при пересадке эмбрионов, не разделённых по полу, частота рождения бычков составляет до 55%. Что имеет немаловажное значение в молочном скотоводстве, где есть большая потребность в ремонтных тёлочках с высокой молочной продуктивностью.
Исходя из этого перед коллективом лаборатории ООО «Бетагран- Липецк» была поставлена задача направленная на создание оптимального протокола оплодотворения и культивирования доимплантированных эмбрионов in vitro. Для этого ооциткумулюсные комплексы получали прижизненно из антарльных фолликулов диаметром 2-6 мм от коров доноров методом TAU (транс вагинальной аспирации. После чего ооциткумулюсные комплексы помещались в среду дюльбекко с добавлением с 5% эстральной сыворотки, 4% р-ра гентамицина и р-ра. гепарина. Поиск и морфологическую оценку осуществляли на стереомикроскопе лабораторного класса, Olympus SZ51 при 200 кратном увеличении. Для экспериментов отбирали ооциты средней величины с мелкозернистой ооплазмой, окруженные компактным многослойным кумулюсом. Для дозревания ооцитов использовали среду 199 (Medium 199, Hepes modification, 25mM.) с добавлением 10% эстральной сыворотки крови крупного рогатого скота, Na-пирувата, BSA, 1.0 ЕД / мл лютенизирующего гормона, 10 ME/мл, фолликулостимулирующего гормона, 1,0мкг / мл эстрадиола (спиртовой раствор) и 50 мкг / мл гентамицина.
Ооциты помещали в лунки планшетов в среду созревания в объёмом 500 мкл под минеральным маслом ("Sigma", США) и культивировали в течение 20-24 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере 5 % CO2 в воздухе. Для оплодотворения использовали разделённое по полу криоконсервированное семя быков в пайэтах объёмом 0,25 мл из расчёта 1 доза на 30 яйцеклеток. Оттаивание производили при температуре + 37 º С в течении 40 секунд. По той же схеме оттаивалось и обычное семя быков. Получение подвижной фракции сперматозоидов проводили путём центрифугирования в градиенте плотности (р-р перколла) при оборотах ротора центрифуги 300G. Выход подвижных сперматозоидов при центрифугировании в градиенте плотности был больше, чем при использовании метода флотации (Swim Up). Для оплодотворения яйцеклетки перемещались в лунки со средой Fert-TALP объёмом 80 мкл. И инкубировались совместно со сперматозоидами в течении 18-20 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере с содержанием 5 % CO2.
После оплодотворения зиготы отмывали в растворе SOF и механически удаляли клетки кумулюса посредством пепетирования при помощи наконечников для денудации ооцитов диаметром 135 мкм. Очищенные зиготы помещались в среду на основе SOF c добавлением BSA, MEM vitamins, MEM Niaa, MEM iaa в лунки планшетов объёмом 500 мкл, покрытые минеральным маслом ( Sigma ,США) и культивировали при температуре 38,5º С в увлажненной атмосфере под газовой фазой (по 5% CO2 и O 2 и 90 % N2) в течение 7-8 суток. Количество оплодотворённых зигот подсчитывали через 48 и 62 часа после оплодотворения.
Для определения эффективности оплодотворения сексированной спермы использовалось заморожено-оттаянное семя пяти быков. Было оплодотворено 1050 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 944 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 89,93%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 29,42%
Таблица 1 Оплодотворяемость и выход эмбрионов сексированное семя
|
№п/п |
Бык |
∑ опл. окк |
∑ дроб. |
% от дроб |
Выход бластоцист |
% от опл. |
% от дроб. |
|
|
1 |
Маузер |
346 |
321 |
93,00% |
94 |
29,28% |
27,16% |
|
|
2 |
Мосби |
358 |
322 |
90,60% |
96 |
29,81% |
26,81% |
|
|
3 |
Коди |
121 |
107 |
88,45% |
50 |
46,72,% |
41,32% |
|
|
4 |
Бигшот |
92 |
88 |
90,88% |
32 |
36,36% |
34,78% |
|
|
5 |
Инспект |
117 |
106 |
91,55% |
37 |
34,90% |
34,90% |
|
|
итого |
1050 |
944 |
89,93% |
309 |
32,73% |
29,42% |
||
Во втором случае использовалось обычное заморожено-оттаянное семя от четырёх быков. Было оплодотворено 770 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 708 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 91,94%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 35,58%.
Таблица 2 Оплодотворяемость и выход эмбрионов обычное семя
|
№п/п |
Вид семени |
∑ опл. окк |
∑ дроб |
% от дроб |
Выход бластоцист |
% от опл. |
% от дроб |
|
1 |
Обычное |
770 |
708 |
91,94% |
274 |
38,70% |
35,58% |
|
2 |
сексированное |
1050 |
944 |
89,93% |
309 |
32,73% |
29,42% |
Таким образом сравнивая вышеперечисленные данные, можно сделать вывод, что
оплодотворяющая способность сексированного и традиционного семени не имеет
значительных расхождений.
Таблица 3 Сравнительная характеристика и эффективность использования
сексированного и традиционного семени при производстве эмбрионов in
vitro.

Так разница составила 2,01% в пользу обычного семени.
Выход эмбрионов был больше на 6,16 в пользу обычного семени. Несмотря на то,
что культивирование эмбрионов производилось на одной культуральной системе,
количество полученных эмбрионов in vitro было выше в группе, где использовалось
обычное семя. Мы предполагаем, что это связанно с окрашиванием сперматозоидов
флуоресцентной краской, из-за чего снижается энергетический запас, что и может
обуславливать меньший жизненный потенциал гамет по сравнению с обычным
семенем, как следствие - остановку развития некоторых эмбрионов.
Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что разработанный протокол оплодотворения и культуральная система обладает высоким потенциалом и позволяет получать в массовом количестве разделённые по полу эмбрионы по технологии in vitro. А также может использоваться для получения зигот и предимплантационных эмбрионов КРС in vitro для различных биотехнологических программ.
Статья взята с сайта © DairyNews.ru http://www.dairynews.ru/news/effektivnost-polucheniya-seksirovannykh-embrionov-.html
18.10.2017 0
Ещё 4 года назад о хлопковой совке аграрии Белгородской области слышали только от коллег из Краснодарского края. Сейчас же этот злостный вредитель появляется в регионе повсеместно, нанося существенный урон местным земледельцам. В этом сезоне проблем аграриям добавила и щирица – резистентный сорняк, который очень сложно вывести. Специалисты Белгородского представительства «Щёлково Агрохим» нашли рецепт спасения урожая.
Пограничное земледелие
Зелёные чистые поля сои всё лето радуют глаз фермера Геннадия Чумака, который уже более 20 лет занимается земледелием в родных краях – Вейделевском районе Белгородской области. Район сложный в разных отношениях. Это юго-восток области, очень засушливый район, зона рискованного земледелия. Сложностей добавляет и географическое расположение близость к зоне проведения СВО. Геннадий Николаевич в родном колхозе имени Ленина трудился сначала механиком, потом – управляющим участка. Когда колхоз прекратил существование, решил заниматься сельским хозяйством самостоятельно.
«За долгие годы работы в колхозе получил аграрный опыт, при этом было желание заниматься этим делом и дальше, стал пробовать, – рассказывает фермер. – Начинал с 200 гектаров, сейчас возделываю зерновые культуры, сою, подсолнечник и кукурузу на 2000 гектарах. Занимался сахарной свёклой, а сейчас упор делаем на возделывание сои, под которую выделено 500 гектаров. Также занимаемся выращиванием подсолнечника (300 гектаров), озимой пшеницы (600 гектаров), ячменя и кукурузы».

Геннадий Чумак – фермер, глава ИП
База ИП Чумак Геннадий Николаевич расположилась в старинном селе Яропольцы, которое соседствует с селом Клименки. Яропольцы когда-то было большим селом со своим родильным домом. В здешнем хозяйстве держали овец, коров и даже табун лошадей в 80 голов. Постепенно население стало редеть. Но патриоты не дают сёлам и землям пустовать. Между чудесных живописных прудов, у двух сёл – Яропольцы и Клименки, расположены земли ИП Чумака, в котором трудится около 15 человек. С компанией «Щёлково Агрохим» фермер работает уже более 10 лет. С главой Белгородского представительства Сергеем Гороховым сложились тёплые, дружеские отношения. Как говорит Геннадий Чумак, «с таким человеком можно смело идти в огонь и в воду». Такое доверие базируется не только на человеческих качествах главы представительства, но и на эффективности продуктов «Щёлково Агрохим», которые за многие годы спасли фермеру десятки тысяч центнеров урожая.
«Посмотрите на поля – соя изумительная! Крепкие и здоровые растения! – говорит Геннадий Чумак. – Как не доверять, когда своими глазами много лет вижу результат! В этом сезоне было немало проблем, погодные условия расслабиться не давали: весенние заморозки, обилие осадков, которые сменяла засуха, прохладная погода… От нового вредителя – хлопковой совки, казалось, не будет никакого спасения. Но я очень доволен, что компания «Щёлково Агрохим» сохранила мои поля и урожай».

Соя в ранних фазах на полях ИП Чумака
Когда знаешь, кто поможет
Заместитель главы Белгородского представительства Ярослав Филимонов работает с ИП Чумак Геннадий Николаевич уже много лет.
«Последние 3 года Геннадий Николаевич тесно занимается соей, в этом году вышли на 100% защиты сои препаратами «Щёлково Агрохим», – рассказывает специалист. – В схеме этого сезона была и протравка семян, и гербицидная защита, и защита против вредителей, и подкормки микроудобрениями. При протравке семян сои мы применили наш фунгицидный протравитель ДЕПОЗИТ СУПРИМ, МЭ, используя его в максимальной норме. Также обязателен инсектицидный протравитель ИМИДОР ПРО, КС. Дополнительно применили ГУМАТ КАЛИЯ СУФЛЁР (0,7 л/т). Таким образом, ДЕПОЗИТ СУПРИМ, МЭ защитил сою от заболеваний, ИМИДОР ПРО, КС – от потенциальных вредителей. В последние годы в нашем регионе часто встречается такой вредитель, как ростковая муха, которая уже на всходах поражает культуру, соответственно снижается густота растений. Отмечу, этот вредитель может уничтожить до половины всходов. А теперь, когда к традиционным вредителям добавилась и хлопковая совка, без инсектицидных продуктов не обойтись, как раньше».

Ярослав Филимонов - заместитель главы Белгородского представительства АО «Щёлково Агрохим»
Дальше начинаются обработки по вегетации. В текущем сезоне для обработок по вегетации была подобрана мягкая схема защиты. В первую обработку применили высокоэффективный контактный послевсходовый гербицид для контроля однолетних двудольных сорняков БЕНИТО, ККР (2,5 л/га), во вторую обработку – послевсходовый системный гербицид КУПАЖ, ВДГ. В эту же схему добавили прилипатель АССИСТЕНТ, чтобы повысить активность гербицидов.
«В последние 2-3 года в эту схему добавляем довсходовый гербицид с длительным почвенным действием ГАЛС, КЭ по вегетации, потому что у этого фермера есть проблемы с падалицей подсолнечника, – добавляет Ярослав Филимонов. – Кломазон в составе этого продукта отлично борется с падалицей подсолнечника, дополняя действие бентазоновых гербицидов, увеличивая их синергизм. Вот эта тройка БЕНИТО, ККР + КУПАЖ, ВДГ + ГАЛС, КЭ – замечательный рецепт в борьбе с падалицей подсолнечника, марью и щирицей. Данной схемой в этом сезоне мы проводили обработку дважды. Но в целом смотрим по состоянию сорной растительности. Например, в прошлом году мы обошлись без дополнительной обработки, а нынче из-за осадков и прохладной погоды решили подстраховаться и дважды обработали все посевы этой схемой. Фермер доволен – посевы идеальные».
После двух обработок по двудольным сорнякам в хозяйстве провели противозлаковую обработку гербицидом ЦЕНЗОР, КЭ, к которому добавили комбинированный инсектоакарицид КИНФОС, КЭ, чтобы сдержать размножение такого опасного вредителя сои, как бабочка-репейница.
В период цветения сои провели обработку жидким боросодержащим микроудобрением УЛЬТРАМАГ БОР и УЛЬТРАМАГ КОМБИ ДЛЯ МАСЛИЧНЫХ, в критическую фазу бутонизации, когда закладывается база под будущие бобы.
ЮНОНА – оружие против совки
Хлопковая совка в Белгородской области появилась в 2022 года. Замглавы Белгородского представительства «Щёлково Агрохим» Ярослав Филимонов называет этого вредителя главной головной болью местных земледельцев: пропустишь фазу – потеряешь урожай.
«Примерно с 15 июля и до конца августа мы наблюдаем лёт бабочки, – рассказывает он. – Против этой беды мы уже второй сезон в ИП Чумака дополнительно проводим обработку инсектицидом контактно-кишечного действия ЮНОНА, МЭ (0,4 л/га). Геннадий Николаевич очень доволен этим продуктом. Это мощный инсектицид, обеспечивающий гибель гусениц не только первого-второго возраста, но и крупных, которых традиционные инсектициды не берут. Здесь максимально важно не допустить массового распространения вредителя, когда гусеница начинает питаться уже цветками и молодыми зёрнами в бобах, а не только листьями. Необходимо быть начеку, так как хлопковая совка может уничтожить весь урожай. Так в 2022 году, когда мы с ней столкнулись в первый раз, в некоторых отделениях одного белгородского крупного холдинга урожай сои был уничтожен совкой до 90%! Хлопковая совка очень устойчива к обычным и традиционным инсектицидам, а ЮНОНА, МЭ имеет 95% эффективности по данному вредителю».
Сам фермер Геннадий Чумак называет совку настоящим кошмаром для земледельцев. Чем только ни боролись с этим вредителем! Испробованы десятки инсектицидов и различных схем – эффект нулевой.
«Сейчас я уже не переживаю, отработали инсектицидом ЮНОНА, МЭ и о совке не вспоминаем, – говорит фермер. – Очень достойный препарат!»
Щирица не приговор
В Белгородском представительстве научились работать с таким сорняком, как щирица запрокинутая, которая приобрела резистентность ко многим гербицидам. В последние 2 года сорняк стал представлять большую опасность для полей в Белгородской области: чуть фазу упустишь, сорняк перерастёт, и его очень сложно уничтожить. Гербициды чуть прижгут сорняк, но после осадков щирица снова начинает ветвиться, разрастаться. Да, по ранним фазам развития этого сорного растения отлично работает вышеупомянутая схема БЕНИТО, ККР + КУПАЖ, ВДГ + ГАЛС, КЭ, но что делать, если щирица перерастает?

Переросшую щирицу смогли одолеть с помощью послевсходового гербицида ТАНТО, ККР с ацифлуорфеном
«В этом году наблюдали переросшую щирицу в одном из крупных холдингов, – рассказывает Ярослав Филимонов. – Зрелище впечатляющее… Мы смогли одолеть её с помощью послевсходового гербицида ТАНТО, ККР с ацифлуорфеном. Важно подобрать дозировку этого продукта, при которой соя не будет угнетаться, а злостный сорняк будет эффективно подавляться. Кстати, в следующем сезоне проведём опыт с ТАНТО, ККР и у Геннадия Чумака. Цель – уйти от повторных обработок сои, выйдя на одну. Площади по этой культуре в регионе существенно увеличились, при этом соя требует к себе повышенного внимания, особой щепетильности, не меньшей, чем в защите другой нежной культуры – сахарной свёклы. Если мы несвоевременно обработаем сою, она, как и сахарная свёкла, закрывает междурядья, что осложняет обработки. Выходит, что, упустив сроки, мы потом угнетаем сою повышенными нормами гербицидов, но при этом очень слабо поборемся с самими сорняками».
Навстречу новым сортам
На сое Геннадий Николаевич на 100% работает с препаратами «Щёлково Агрохим», доверяя компании и специалистам безоглядно. А в будущем году фермер будет закладывать опытные участки с сортами сои селекции «Щёлково Агрохим». Совсем недавно он вернулся с международного осеннего АгроФестиваля Вetaren-2025, прошедшего на базе сельхозпредприятия «Дубовицкое» в Орловской области. Там были представлены новейшие сорта сои селекции «Щёлково Агрохим»: СамЕЦ, Бинго, Тейри, Лада СД и другие – есть из чего выбирать.
«В предстоящем сезоне хочу попробовать несколько сортов сои и озимой пшеницы селекции «Щёлково Агрохим», – рассказывает фермер. – Будем ставить демонстрационные опыты, сравнивать с сортами хозяйства. Очень привлекают такие сорта озимой пшеницы, как Ермоловка и Зюгановка, присматриваюсь, есть желание испытать. Хотя есть нюансы: наше хозяйство расположено на юго-востоке Белгородской области, где выпадает 250-300 мм осадков в год, в отличие от 600 мм в Орловской области, где располагается опытное хозяйство «Щёлково Агрохим». Но я уверен, компании есть что нам предложить и в этой ситуации!»
Замглавы Белгородского представительства Ярослав Филимонов считает, несмотря на то, что на Белгородчине имеется очень сильный краснодарский клин сортов озимой пшеницы, щёлковские сорта в здешних условиях могут показывать не менее достойные результаты, и опытные участки с нашими схемами защиты этой культуры в ИП Чумака будут заложены непременно.
«Наша задача – показать, что мы эффективнее, что наши решения по защите пшеницы лучше, чем у других компаний, что наши сорта высокоурожайны, – говорит Ярослав. – Уже сейчас заключён договор с хозяйством о закладке в следующем году участков со схемами защиты «Щёлково Агрохим» на озимой пшенице (сейчас в ИП Чумак на озимой пшенице применяются СЗР другой компании). Рассматривает Геннадий Николаевич и постепенное внедрение наших сортов и гибридов».
Был бы мир да урожай
Фермер Геннадий Чумак любит и ценит родные места. Для него, как и для всех селян, сбор урожая – это священный труд и великий праздник, который, как водится, отмечают всем селом. Радеет Геннадий Николаевич и за качество жизни односельчан: летом обязательно обкашивает общественные территории, реализует продукцию и зерно местным жителям по льготным ценам, организует праздники, ремонтирует местный ФАП.
«Места у нас очень красивые: три пруда вокруг деревни, хорошие места для охоты и рыбалки. Но эти развлечения для нас доступны только зимой – сейчас трудимся денно и нощно. В будущем году планируем ввести в эксплуатацию большой зерноочистительный комплекс и сушилку для зерна, которая так необходима в неустойчивом климате юго-востока области, – рассказывает о планах фермер. – Уже активно ведётся стройка, обустраиваются подъездные пути. Живём и работаем – был бы мир да урожай!»



