18.10.2017: Как это осуществляется в "Бетагран - Липецк".
 |
Дмитрий Машталер
старший эмбриолог ООО "Бетагран- Липецк"
В течении последнего времени в России уделяется существенное внимание вопросам в области воспроизводства стада и повышения уровня племенных качеств животных, так как это является краеугольным камнем в отечественном животноводстве. Однако успешное решение данных вопросов невозможно без использования современных методов и технологий, которые уже давно нашли свое применение в странах Запада.
Получение эмбрионов крупного рогатого скота методом in vitro - современный и прогрессивный биотехнологический метод, позволяющий значительно ускорить процесс воспроизводства высокопродуктивных животных. Данный метод состоит из нескольких этапов: извлечение ооцитов из антральных фолликулов яичника (OPU), созревания ооцитов (IVM - in vitro maturation); оплодотворения (IVF - in vitro fertilization) и эмбриональной культуры (IVC - in vitro culture). Важным аспектом данной технологии является то, что получать яйцеклетки от животных доноров можно как прижизненно, используя метод трансвагинальной аспирации, так и от убойного материала (яичники коров с мясокомбината). Получение разделённых по полу эмбрионов - востребованный и перспективный метод, который заключается в оплодотворении яйцеклеток сексированной спермой быков. Оплодотворение яйцеклеток разделённой по полу спермой в отличие от обычной даёт возможность получать особей желательного пола с вероятностью до 93 %. Помимо возможностей в области селекции данный метод имеет и ряд экономических преимуществ, а именно: при пересадке эмбрионов, не разделённых по полу, частота рождения бычков составляет до 55%. Что имеет немаловажное значение в молочном скотоводстве, где есть большая потребность в ремонтных тёлочках с высокой молочной продуктивностью.
Исходя из этого перед коллективом лаборатории ООО «Бетагран- Липецк» была поставлена задача направленная на создание оптимального протокола оплодотворения и культивирования доимплантированных эмбрионов in vitro. Для этого ооциткумулюсные комплексы получали прижизненно из антарльных фолликулов диаметром 2-6 мм от коров доноров методом TAU (транс вагинальной аспирации. После чего ооциткумулюсные комплексы помещались в среду дюльбекко с добавлением с 5% эстральной сыворотки, 4% р-ра гентамицина и р-ра. гепарина. Поиск и морфологическую оценку осуществляли на стереомикроскопе лабораторного класса, Olympus SZ51 при 200 кратном увеличении. Для экспериментов отбирали ооциты средней величины с мелкозернистой ооплазмой, окруженные компактным многослойным кумулюсом. Для дозревания ооцитов использовали среду 199 (Medium 199, Hepes modification, 25mM.) с добавлением 10% эстральной сыворотки крови крупного рогатого скота, Na-пирувата, BSA, 1.0 ЕД / мл лютенизирующего гормона, 10 ME/мл, фолликулостимулирующего гормона, 1,0мкг / мл эстрадиола (спиртовой раствор) и 50 мкг / мл гентамицина.
Ооциты помещали в лунки планшетов в среду созревания в объёмом 500 мкл под минеральным маслом ("Sigma", США) и культивировали в течение 20-24 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере 5 % CO2 в воздухе. Для оплодотворения использовали разделённое по полу криоконсервированное семя быков в пайэтах объёмом 0,25 мл из расчёта 1 доза на 30 яйцеклеток. Оттаивание производили при температуре + 37 º С в течении 40 секунд. По той же схеме оттаивалось и обычное семя быков. Получение подвижной фракции сперматозоидов проводили путём центрифугирования в градиенте плотности (р-р перколла) при оборотах ротора центрифуги 300G. Выход подвижных сперматозоидов при центрифугировании в градиенте плотности был больше, чем при использовании метода флотации (Swim Up). Для оплодотворения яйцеклетки перемещались в лунки со средой Fert-TALP объёмом 80 мкл. И инкубировались совместно со сперматозоидами в течении 18-20 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере с содержанием 5 % CO2.
После оплодотворения зиготы отмывали в растворе SOF и механически удаляли клетки кумулюса посредством пепетирования при помощи наконечников для денудации ооцитов диаметром 135 мкм. Очищенные зиготы помещались в среду на основе SOF c добавлением BSA, MEM vitamins, MEM Niaa, MEM iaa в лунки планшетов объёмом 500 мкл, покрытые минеральным маслом ( Sigma ,США) и культивировали при температуре 38,5º С в увлажненной атмосфере под газовой фазой (по 5% CO2 и O 2 и 90 % N2) в течение 7-8 суток. Количество оплодотворённых зигот подсчитывали через 48 и 62 часа после оплодотворения.
Для определения эффективности оплодотворения сексированной спермы использовалось заморожено-оттаянное семя пяти быков. Было оплодотворено 1050 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 944 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 89,93%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 29,42%
Таблица 1 Оплодотворяемость и выход эмбрионов сексированное семя
|
№п/п |
Бык |
∑ опл. окк |
∑ дроб. |
% от дроб |
Выход бластоцист |
% от опл. |
% от дроб. |
|
|
1 |
Маузер |
346 |
321 |
93,00% |
94 |
29,28% |
27,16% |
|
|
2 |
Мосби |
358 |
322 |
90,60% |
96 |
29,81% |
26,81% |
|
|
3 |
Коди |
121 |
107 |
88,45% |
50 |
46,72,% |
41,32% |
|
|
4 |
Бигшот |
92 |
88 |
90,88% |
32 |
36,36% |
34,78% |
|
|
5 |
Инспект |
117 |
106 |
91,55% |
37 |
34,90% |
34,90% |
|
|
итого |
1050 |
944 |
89,93% |
309 |
32,73% |
29,42% |
||
Во втором случае использовалось обычное заморожено-оттаянное семя от четырёх быков. Было оплодотворено 770 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 708 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 91,94%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 35,58%.
Таблица 2 Оплодотворяемость и выход эмбрионов обычное семя
|
№п/п |
Вид семени |
∑ опл. окк |
∑ дроб |
% от дроб |
Выход бластоцист |
% от опл. |
% от дроб |
|
1 |
Обычное |
770 |
708 |
91,94% |
274 |
38,70% |
35,58% |
|
2 |
сексированное |
1050 |
944 |
89,93% |
309 |
32,73% |
29,42% |
Таким образом сравнивая вышеперечисленные данные, можно сделать вывод, что
оплодотворяющая способность сексированного и традиционного семени не имеет
значительных расхождений.
Таблица 3 Сравнительная характеристика и эффективность использования
сексированного и традиционного семени при производстве эмбрионов in
vitro.
Так разница составила 2,01% в пользу обычного семени.
Выход эмбрионов был больше на 6,16 в пользу обычного семени. Несмотря на то,
что культивирование эмбрионов производилось на одной культуральной системе,
количество полученных эмбрионов in vitro было выше в группе, где использовалось
обычное семя. Мы предполагаем, что это связанно с окрашиванием сперматозоидов
флуоресцентной краской, из-за чего снижается энергетический запас, что и может
обуславливать меньший жизненный потенциал гамет по сравнению с обычным
семенем, как следствие - остановку развития некоторых эмбрионов.
Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что разработанный протокол оплодотворения и культуральная система обладает высоким потенциалом и позволяет получать в массовом количестве разделённые по полу эмбрионы по технологии in vitro. А также может использоваться для получения зигот и предимплантационных эмбрионов КРС in vitro для различных биотехнологических программ.
Статья взята с сайта © DairyNews.ru http://www.dairynews.ru/news/effektivnost-polucheniya-seksirovannykh-embrionov-.html
18.10.2017 0
Если у вас в саду десяток плодовых деревьев, услышав предупреждение синоптиков о ночных заморозках, можно попробовать укрыть яблони флизелином, применить задымление, пролить почву. Но если это 3000 га промышленного сада, остаётся надеяться только на чудо.
Именно такая ситуация сложилась прошлой весной в Новой Усмани на полях Центрально-Чернозёмной плодовой компании, когда в конце апреля – начале мая температура воздуха ночью опустилась местами до –6 °С. Заморозки затронули и озимые, пострадало более 10 тыс. га посевов, но сильнее всего досталось садоводам: на Центральном Черноземье холода погубили третью часть садов. Даже у дубов-колдунов, которыми так славится Воронежская область, молодые побеги почернели от мороза. Что уж говорить о нежных яблонях и грушах. Кроме того, третью часть насаждений летом повредил град.
И ведь это второй год подряд! Ещё совсем свежи воспоминания о режиме ЧС весной 2024 года, когда потери урожая в плодово-ягодных хозяйствах ЦЧР достигли 90%. Тогда синоптики сообщали об аномальной погоде в мае в Центральной России как о редчайшем явлении и связывали это с наступлением холодных воздушных масс Северного Ледовитого океана. По-видимому, глобальные изменения климата ведут к тому, что аномалия становится нормой. И встаёт извечный русский вопрос: что делать?
Сложный год
Рассказывает главный агроном Центрально-Чернозёмной плодовой компании Александр Сажин: «В этом году нашему предприятию исполнилось 20 лет. Первые посадки были произведены около 15 лет назад. У нас есть как старые сады, так и молодые – разновозрастные площади насаждений. В конце апреля 2025 года, как и в 2024 году, на нас обрушились возвратные заморозки, причём попали на фазу «цветение – розовый бутон», – вспоминает Александр Сажин. – В низинах и на некоторых других участках температура упала до –6 °С. Многие садоводы знают, что фаза бутонизации – очень уязвимый период в развитии растений. Заморозки в это время снижают урожайность в целом и отрицательно влияют на товарный вид плодов.
К концу прошлого сезона для нас лимитирующим фактором стала влага. Так, сентябрь 2024 года стал самым засушливым за всю историю наблюдений за погодой на Центральном Черноземье. Тогда у нас выпало не более 0,3 мм осадков вместо среднемноголетней нормы 50 мм. Со снегом тоже не задалось. Таким образом, к весне 2025 года мы пришли с дефицитом осадков. А наличие влаги для начала вегетации и цветения завязи может быть критично».
Главный агроном хозяйства Александр Сажин окончил Воронежский аграрный университет. Профессионально занимается плодовыми культурами уже 14 лет
Сорта
Сортовой состав плодовых насаждений в хозяйстве очень разный. Всего плодовыми насаждениями занято 3000 га. Среди них есть сады интенсивного типа, а есть и экстенсивные сорта. Примерно половину старых садов уже раскорчевали, но дело это дорогостоящее, требующее больших затрат техники и людей.
Устойчивость к заморозкам зависит от сорта и его иммунных возможностей. Среди сортов интенсивного типа можно назвать такие популярные сорта, как Гала, Джонаголд, Чемпион. От интенсивных садов в целом отдача приходит быстрее и в большем объёме. Считается, что экстенсивные сады – это, скорее, обременение, от которого лучше побыстрее избавиться. Но не всегда.
Примечательно, что старовозрастные по современным меркам насаждения: старые сорта осеннего срока созревания, такие как Вишнёвое, Жигулёвское, Орловское полосатое, или зимние сорта – Богатырь, Россошанское полосатое, Северный Синап – гораздо легче переносят возвратные холода. Так, в старом саду при возвратных заморозках потенциальный урожай выше и может достигать 30–40 т/га. Собственно, благодаря этим знаменитым сортам (Богатырь, 1971 г. включения в реестр; Северный Синап – 1959 г.) нашим садоводам и удалось поддержать экономику в текущем сезоне. Если из интенсивных садов товарное яблоко поступает в сети, то большая часть урожая со старых садов, как правило, идёт на переработку: это концентрат сока, компоты, повидло.
Заложить сад
«По нашим данным, – продолжает Александр Сажин, – закладка сада обходится как минимум в 4 млн руб./га. Сюда входит посадочный материал шпалерная установка, подвод воды, подкормка, плюс вся необходимая техника, опрыскиватели. Посадочный материал у нас местный, районированный. Берём его в хороших питомниках».
Если в старых садах на один гектар приходилось от 250 до 550 штук деревьев, то в садах интенсивного типа на одном гектаре размещают от 2000 до 4000 яблонь, хотя и это число в особо плотных посадках может варьироваться. Такая высокая плотность достигается за счёт использования карликовых и среднерослых сортов и плотной схемы посадки, например, 3 м между рядками и 0,8 м между деревьями в рядке, – поясняет Сажин. – В плодоношение интенсивные сады вступают на третий-пятый год и эксплуатируются до 15 лет. Потом насаждения заменяют».
Не покладая рук
Работа в саду и так очень трудоёмка, а там, где деревья сильнорослые, с высокой раскидистой кроной, проводить качественные химобработки особенно трудно. Рабочий раствор может не всегда попадать в нужное место.
В интенсивных технологиях количество подкормок за сезон достигает пяти и более, включая внесение основного удобрения и микроэлементы. Плюс защитные мероприятия, в которых количество обработок в разные годы может доходить до 16–18 за вегетацию. В садовом деле как нигде много ручного труда, а с кадрами всегда напряжённо.
«Правильная обрезка деревьев первым делом влияет на качество садов, а это тоже всё ручной труд, – продолжает главный агроном. – Конечно, грамотные обрезчики есть, но рук едва хватает. Механизированная обрезка в принципе существует, но в нашем хозяйстве её пока не применяют. Скорее, в механическую обрезку пойдут старые сады. На уборку здесь привлекают в том числе студентов, которые за световой день могут заработать до 5 тыс. руб. Как правило, механизаторы очень стараются всё делать в оптимальные сроки.
При оптимальных погодных условиях и правильной агротехнике интенсивный сад начинает себя окупать на 4–5-й год
Сети
Требования сетей при этом крайне жёсткие. Центрально-Чернозёмная плодовая компания сотрудничает с сетями «Магнит», «Перекрёсток», «Верный». Все они во имя защиты интересов потребителей и поддержания высокой репутации диктуют свои условия реализации, а поставщик продукции должен им соответствовать. Яблоко должно быть первого или высшего сорта, всегда свежим, без признаков повреждений болезнями и вредителями; идеальные, откалиброванные партии. Без пятен, следов нажимов, с равномерной сортовой окраской.
Сотрудничество
Вот уже второй год Центрально-Чернозёмная плодовая компания плотно работает с производителем СХЗР компанией «Щёлково Агрохим». Как вспоминает Александр Панин, ведущий менеджер по продажам Воронежского представительства «Щёлково Агрохим», всё начиналось по принципу: «Доверяй, но проверяй».
Александр Панин - ведущий менеджер по продажам Воронежского представительства «Щёлково Агрохим»
Прежде всего представители клиента приехали на завод в г. Щёлково (Московская область), чтобы своими глазами увидеть уровень производства. Посетили цеха и научные лаборатории. Ознакомились с технологическим процессом. Увиденным остались довольны. Потом целый сезон заняли полевые испытания. И только после большого количества производственных испытаний на местах, убедившись в том, что предложенные схемы защиты сада реально работают, клиент проникся доверием.
Если 10 лет назад для защиты садов компания «Щёлково Агрохим» могла предложить 2–3 зарегистрированных препарата, сегодня это целая линейка СХЗР, ориентированных именно на защиту плодовых. Большой портфель препаратов «Щёлково Агрохим» позволяет подобрать оптимальную защиту урожая практически на любой случай, связанный с нашествием вредителей или заболеваниями. Вот и в нынешнем сезоне было не обойтись без инсектицидной и фунгицидной защиты. На страже урожая стояли КИНФОС, КЭ, ТЕЙЯ, КС, КАПЕРАНГ, КС, ИНДИГО, КС, ГРЕННИ, КС, МЕДЕЯ, МЭ.
Однако в этом году пришло время убедиться в целесообразности, казалось бы, необязательных фитогормонов и аминокислот. Возвратные заморозки в Новой Усмани стали звёздным часом для другого инновационного препарата «Щёлково Агрохим» – ГИББЕРА, ВР.
Эта невероятная химия
Исследователи отмечают, что вещества гиббереллиновой природы, обладающие широким спектром биохимического и физиологического действия, являются природными регуляторами роста и участвуют в важных внутриклеточных процессах. Они обладают многими замечательными свойствами, в частности способностью притягивать питательные вещества к зонам активного роста. В малых дозах эти вещества вызывают формативное действие, в частности закладку почек.
Фитогормоны, к которым относятся и гиббереллины, координируют разнообразные жизненные функции растений, способствуя их приспособлению к внешним условиям. Это регуляция не только роста и развития, но и усвоения углерода и баланса ассимилянтов, водного обмена и устойчивости к неблагоприятным климатическим факторам.
Садоводы знают, что количество заложенных цветков определяет потенциальный урожай. Однако большинство цветков весной сбрасывается, из-за того что оплодотворение не состоялось. Лишь небольшая часть цветков даёт плоды. Невысокие показатели завязывания у косточковых культур, как правило, связаны с недостаточным опылением. Причиной тому становятся неблагоприятные погодные условий в период цветения (низкие температуры воздуха, пасмурная погода, суховеи и т.д.).
Из семечковых культур учёные «Щёлково Агрохим» рекомендуют применять препарат ГИББЕРА, ВР именно на яблоне. Количество действующих веществ (10 г/л гиббереллиновых кислот GA4 и GA7) рассчитано специально для поддержки яблони в период цветения и плодоношения, когда так необходимо увеличить количество бутонов, завязей и плодов, усилить ростовые и формообразовательные процессы. Кроме того, препарат предупреждает растрескивание и изменение цвета плодов в конце вегетационного периода, улучшает товарный вид и качество продукции.
Если при возвратных заморозках температура опускается ниже критических значений (обычно это до –2 оC), ущерб неминуем. Цветочные почки могут быть полностью уничтожены
Что по итогу?
При оптимальных погодных условиях и современных схемах защиты интенсивный сад на Черноземье может давать до 80 тонн плодов с гектара. В этом году недобор по урожаю в среднем составил 60%. Но когда у соседей – ноль, начинаешь ценить и небольшие успехи.
«К сожалению, мы получили урожай около 20 т/га. Конечно, хотелось больше, но можно было лишиться и этого, – говорит Александр Сажин. – На стадии розового бутона яблони очень уязвимы к заморозкам. Повреждение может коснуться цветочных почек и завязей. Если заморозки вызывают гибель большинства или части почек, это неизбежно приводит к значительным потерям урожая. Но мы успели сработать по максимуму. Вероятно, своевременная обработка препаратом ГИББЕРА, ВР в комплексе с другими мероприятиями помогла нам не проиграть в этом сезоне».